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藥物誘導(dǎo)基因敲除實(shí)驗(yàn)(如他mo昔芬系統(tǒng)或四環(huán)素系統(tǒng))是在靶基因兩側(cè)插入特定重組酶識(shí)別位點(diǎn)后,通過給藥定時(shí)激活Cre-ER或Tet-On/Tet-Off等重組酶,實(shí)現(xiàn)特定器官、特定時(shí)間點(diǎn)的高效基因刪除,兼顧全身敲除的che底性與條件性敲除的時(shí)空精度,是研究基因功能和藥物靶點(diǎn)驗(yàn)證的利器。
DTA負(fù)篩選基因?qū)嶒?yàn):DTA(Diphtheria Toxin A)負(fù)篩選基因是一種常用的遺傳工程工具,主要用于剔除未發(fā)生特定重組事件的細(xì)胞。這種技術(shù)依賴于白喉毒素A鏈(DTA),它能抑制蛋白質(zhì)合成并導(dǎo)致細(xì)胞死亡。在基因打靶實(shí)驗(yàn)中,DTA通常被用來(lái)作為負(fù)篩選標(biāo)記,以確保只有那些經(jīng)歷了正確同源重組的細(xì)胞才能存活下來(lái)。
單堿基編輯實(shí)驗(yàn)是一種基于CRISPR系統(tǒng)的精準(zhǔn)基因編輯技術(shù),可在不誘導(dǎo)DNA雙鏈斷裂(DSB)的前提下,直接實(shí)現(xiàn)基因組中單個(gè)堿基的定向轉(zhuǎn)換。其核心突破在于規(guī)避了傳統(tǒng)CRISPR-Cas9依賴的DSB修復(fù)路徑(如易出錯(cuò)的NHEJ),顯著提升編輯安全性與精確度。
移碼突變實(shí)驗(yàn)是一種由非3倍數(shù)核苷酸(1、2、4、5...個(gè)堿基)在基因編碼區(qū)的插入或缺失(Indels)引起的基因突變。其本質(zhì)在于破壞三聯(lián)體密碼子的連續(xù)性,導(dǎo)致閱讀框偏移(Reading Frame Shift),使突變點(diǎn)下游的氨基酸序列wan全改變或提前終止
非同源末端連接實(shí)驗(yàn)(NHEJ) 是細(xì)胞修復(fù)DNA雙鏈斷裂(DSBs)的核心途徑,其核心特征為無(wú)需同源模板,直接重新連接斷裂的DNA末端。
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